晶美生物經(jīng)過(guò)不斷的實(shí)驗(yàn)優(yōu)化和改進(jìn),積累了大量的經(jīng)驗(yàn)。為方便客戶(hù),晶美生物提供ELISA代測(cè)技術(shù)服務(wù)!您只需將需要檢測(cè)的種屬和檢測(cè)指標(biāo)及標(biāo)本數(shù)量通知公司工作人員即可。
標(biāo)本收集的注意事項(xiàng):
液體樣本的收集
1、血清:用無(wú)菌管收集,室溫血液自然凝固10-20分鐘,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。
2、血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、肝素鈉或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。
3、尿液、胸腹水、腦脊液、唾液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、牛奶、蜂蜜:用無(wú)菌管收集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
4、全血:用含有抗凝劑的無(wú)菌管收集,立即輕輕搖動(dòng),來(lái)回輕輕顛倒數(shù)次,使血液和抗凝劑混勻,以防血液凝固。
固體樣本的收集
1、組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱(chēng)取1g組織,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清。分裝一份待檢測(cè),其余冷凍備用,保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。對(duì)于植物組織,不好勻漿的話(huà),就在液氮中充分研磨。
2、細(xì)胞內(nèi)蛋白樣本:許多待測(cè)蛋白不是分泌蛋白,而是存在于細(xì)胞內(nèi)的蛋白,這個(gè)時(shí)候,要先收集細(xì)胞,洗滌干凈,再破碎細(xì)胞,離心取上清。
(1)培養(yǎng)的細(xì)胞
A、動(dòng)物細(xì)胞:用PH7.2-7.4的PBS稀釋細(xì)胞懸液,使細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融(如果反復(fù)凍融,破碎效果不好,就采用超聲波破碎),以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
B、植物細(xì)胞:用PH7.2-7.4的PBS稀釋細(xì)胞懸液,使細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右,置于冰盒上,用超聲破碎儀,設(shè)置破碎2s,冷卻30s的方式,充分破碎細(xì)胞,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)組織的細(xì)胞
切割標(biāo)本后,稱(chēng)取1g組織,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),去除上清,再用pH7.2-7.4左右的PBS小心洗滌沉淀的細(xì)胞三遍。再用上述的細(xì)胞破碎方法破碎細(xì)胞。
3、細(xì)胞內(nèi)蛋白樣本:許多待測(cè)蛋白不是分泌蛋白,而是存在于細(xì)胞內(nèi)的蛋白,這個(gè)時(shí)候,要先收集細(xì)胞,洗滌干凈,再破碎細(xì)胞,離心取上清。
4、咽拭子:加入2g的pH7.2-7.4左右的PBS,溶解咽拭子頭部,搖勻,用鑷子取出咽拭子并擠干液體,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清。分裝一份待檢測(cè),其余冷凍備用,保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。如果是測(cè)分泌蛋白,直接取上清檢測(cè),測(cè)試細(xì)胞內(nèi)蛋白,要破碎細(xì)胞。
5、植物標(biāo)本:稱(chēng)取0.1g(誤差±3%以?xún)?nèi))新鮮植物組織樣本,在液氮中充分研磨,加入1ml的提取液(80%甲醇),置于-20度過(guò)夜,于4度,8000rpm,離心1小時(shí),取上清,上清液過(guò)C-18固相萃取柱。具體步驟是: 80%甲醇(1ml)平衡柱→上樣→收集樣品→移開(kāi)樣品后用100%甲醇(5ml)洗柱→100%乙醚(5ml)洗柱→100%甲醇(5ml)洗柱→循環(huán)。過(guò)柱后的樣本真空干燥或氮?dú)獯蹈桑4鎮(zhèn)溆�,上樣前加入pH7.4 PBS緩沖液(1ml定容)。混勻后室溫放置30分鐘,然后4度離心(8000rpm,15分鐘),取上清并暫時(shí)保存于4度待用。
寄標(biāo)本時(shí)需注明以下情況:
1、標(biāo)本編號(hào)
2、所測(cè)項(xiàng)目
3、是否做復(fù)孔
4、聯(lián)系方式
5、實(shí)驗(yàn)后標(biāo)本是否寄回
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